Овуляция в криопротоколе


Криопротокол после неудачной попытки ЭКО: шансы, подготовка к переносу

access_time0 мин


ЭКО — вспомогательная репродуктивная технология, которая заключается в оплодотворении яйцеклетки за пределами женского организма. На 3-5 день развития эмбрионы переносят в полость матки, где они имплантируются и продолжают рост. Это самый эффективный метод лечения бесплодия. Однако, экстракорпоральное оплодотворение не всегда заканчивается успешно — вероятность наступления беременности у женщин до 30-35 лет составляет примерно 50%. С возрастом этот показатель снижается. Чтобы дать паре повторный шанс стать родителями после неудачного ЭКО, в современных клиниках предлагают выполнить криоперенос.

Содержание статьи

  • Суть криопротокола
  • Криопротокол в естественном цикле
  • Криопротокол с замещающей гормонотерапией
  • Криопротокол в стимулированном цикле
  • Показания и противопоказания 
  • Преимущества и недостатки
  • Подготовка 
  • Этапы переноса эмбрионов

Что такое протокол криосекции

Криосекционирование Введение

Процедура криосекции также известна как процедура замороженной секции. Это лабораторная процедура, используемая для проведения микроскопического анализа образца. Эта процедура чаще всего используется в онкологической хирургии. Для интраоперационной консультации необходим патолог. Патолог оценивает и исследует образец. Затем патолог сообщает, является ли образец доброкачественным или злокачественным. Они также несут ответственность за информирование о том, свободен ли край резекции от рака.Практикуемая сегодня процедура криосрезов основана на технике, описанной доктором Луи Б. Уилсоном в 1905 году. Криосрезы - это хороший способ визуализировать мельчайшие детали клетки. Хотя срезы менее стабильны, чем срезы, залитые смолой и парафином, криосрезы обычно лучше подходят для сохранения и обнаружения антигенов с помощью микроскопии. Подготовка к криосекции обычно выполняется за день. Быстрое замораживание помогает уменьшить образование кристаллов льда и минимизировать морфологические повреждения.Криосрезы можно использовать в различных процедурах, таких как гибридизация in situ, иммуногистохимия и ферментативная деградация.

Реагенты

Некоторые из реагентов, используемых в протоколе криосрезов:

· Фиксатор (например, формальдегид)

· Компаунд для оптимальной температуры резки (OCT) (например, Tissue-Tek; Sakura Finetek USA)

· Окрашивание раствор (например, толуидиновый синий, гематоксилин, эозин или др.)

· Образец свежей ткани

Оборудование для криосекции

Важное оборудование, которое потребуется при выполнении протокола криосекции:

· Кисть (верблюжья шерсть)

· Контейнер для хранения образца ткани

· Криостат с металлическими решетками (Криостат можно сравнить с микротомом в морозильной камере.Это машина, способная нарезать тонкие срезы. Хотя в дорогих больничных патологических лабораториях можно арендовать криостаты)

· Предметные стекла (предметные стекла могут быть силанизированы или покрыты поли-L-лизином)

· Пластмассовая или металлическая тканевая форма

· Смоченные ткани

Процедура криосекции

Процедура криосекции может быть выполнена быстро, поскольку она относительно проста.

A) Подготовка криостата

i) Используйте подходящие чистящие средства и очистите криостат.

ii) Вставьте новое стерильное лезвие в криостат.

iii) Если речь идет о замороженных залитых блоках или свежезамороженных образцах, используйте замороженный материал для заливки, чтобы прикрепить образец к оправе в правильном положении для резки. Убедитесь, что режущая поверхность параллельна лезвию.

iv) Дать образцу уравновеситься до температуры криостата. Это занимает примерно 20 минут.

B) Подготовка криосрезов

i) Заморозить образец ткани до 2 раз.0 см в диаметре в ОКТ с использованием подходящей тканевой формы. Прикрепите ОКТ с тканью к металлическим сеткам криостата. При комнатной температуре OCT вязкий, но замерзает при -20⁰C. В зависимости от типа ткани оптимальная температура замораживания может отличаться. Например, ткани мозга оптимально замораживают при -3 ° C в среде M-1.

ii) Вырежьте срезы размером примерно от 5 до 15 мкм в криостате при температуре -20 ° C. Температуру камеры резки можно регулировать в зависимости от исследуемой ткани.Эти участки при необходимости можно перемещать с помощью зубочисток и щеток. Щеточка из верблюжьей шерсти может быть полезна для направления сливающейся части по лезвию.

iii) Удалите складки и складки на разрезанных участках.

iv) В течение 1 минуты после разрезания среза ткани перенесите его на предметное стекло при комнатной температуре, прикоснувшись предметным стеклом к ​​ткани. Это позволяет отрезанной части прилипать к слайду. Пальцем в перчатке потрите нижнюю часть предметного стекла, чтобы улучшить передачу тепла, так как это способствует сцеплению.Все это должно быть выполнено в течение 1 минуты после резки секции. Это позволяет избежать сублимационной сушки образца. Использование слайдов, покрытых силанизированным или поли-L-лизином, улучшает сцепление среза.

v) Дополнительным шагом является использование ультрафиолетовой обработки предметного стекла для увеличения прилипания и стерилизации. Это можно сделать, инкубируя предметное стекло в течение 15-20 минут под ультрафиолетовым светом. Лучше всего использовать ультрафиолетовый стерилизационный кожух.Свет слегка разрушает мембрану, что способствует склеиванию и стерилизации. Важно не инкубировать дольше 30 минут, так как это может повредить мембрану.

vi) Для оценки сохранности и ориентации ткани первое слайд из каждого набора можно окрасить толуидиновым синим, эозином, гематоксилином или различными водными красителями.

vii) Немедленно погрузите предметное стекло в фиксатор. Некоторые исследователи сушат секцию на предметном стекле при температуре воздуха, чтобы обеспечить максимальное прилегание перед фиксацией.Однако этот метод имеет недостаток, заключающийся в том, что поверхностное натяжение вызывает искажение ячеек, что приводит к потере деталей с высоким разрешением. Это также может привести к изменению результатов иммуноокрашивания.

viii) Любые неиспользованные ткани должны быть покрыты слоем ОКТ, чтобы избежать сублимационной сушки и хранения оставшихся образцов при -70⁰C. При длительном хранении добавление в контейнер влажной ткани помогает предотвратить высыхание, особенно в морозильной камере.

Устранение неисправностей криосечения

Если ткань трудно разрезать, важно учитывать следующее:

· Если замороженная ткань в ОКТ не разрезана на тонкий и гладкий лист, нож может затупиться.

· Ткань может быть трудно разрезать, если ткани имеют изменчивую структуру, воду или жир.

Ссылки

1) Fischer AH, Jacobson KA, Rose J, Zeller R. Криосекция тканей. CSH Protoc. 2008: pdb.prot4991.

2) Протокол криосекционирования. Молекулярные машины и отрасли. Дата обращения 8.01.2019. http://www.molecular-machines.com/libraries.files/Cryosectioning.pdf

.

Замораживание бластоцист и эмбрионов при ЭКО, витрификации и криоконсервации

Что такое витрификация при ЭКО?

  • Для эмбриологов витрификация - это сверхбыстрое замораживание эмбрионов ЭКО вместо традиционного процесса медленного замораживания
  • В научном словаре стеклование - это процесс превращения чего-либо в стеклообразное твердое вещество, в котором отсутствуют какие-либо кристаллы.

Например, добавив криопротектор, воду можно охладить до тех пор, пока она не затвердеет, как стекло, без образования кристаллов льда.Это важно в мире эмбриологии, потому что образование кристаллов льда может быть очень разрушительным для замороженных эмбрионов (или других замороженных клеток).

Витрификация при ЭКО может позволить заморозить запасные эмбрионы с более высокой выживаемостью после оттаивания, а также более высокой частотой беременностей и живорождений в результате циклов переноса замороженных эмбрионов.

Мы начали витрификацию бластоцист в нашей лаборатории ЭКО в начале 2008 года и наблюдали отличную выживаемость эмбрионов после размораживания и значительно более высокие показатели беременности после процедур замороженного переноса.

Краткий урок истории

В 1972 г. впервые были успешно заморожены доимплантационные эмбрионы млекопитающих. Метод был очень трудоемким. Использовалось медленное охлаждение (1 градус / мин или меньше) примерно до -80 градусов по Цельсию. Затем эмбрионы помещали в жидкий азот.

Эмбрионы также нужно было медленно разморозить, добавить и удалить криопротектор в несколько этапов. Это было много работы.

Первая зарегистрированная беременность у людей от замороженных эмбрионов произошла в 1983 году.

Большинство исследований было проведено на эмбрионах мышей. Развитие замороженных размороженных эмбрионов мышей in vitro и in vivo статистически не снижается по сравнению с их незамороженными аналогами.

  • Теперь это может быть верно и для человеческих эмбрионов
  • Исследования в этой области продолжаются, и протоколы замораживания и оттаивания человеческих эмбрионов значительно улучшились за последние 25 лет
  • В некоторых клиниках (в том числе и в нашей) более новая методика витрификации демонстрирует показатели успешности переноса эмбрионов бластоцисты после замораживания и оттаивания, которые эквивалентны показателям успешности переноса свежих бластоцист
.

Протокол ЭКО Lupron с использованием препаратов для стимуляции яичников

График, показывающий уровни гормона эстрогена во время стимуляции ЭКО
Эстрадиол начинает низкий и повышается до 1000-4000 пг / мл к моменту инъекции ХГЧ

Остановка протокола Lupron

Некоторые женщины будут «чрезмерно подавлены» стандартным длинным протоколом или будут плохо реагировать по какой-либо другой причине. Протокол «стоп люпрон» - это одна из возможностей для лучшего ответа на стимуляцию.

В соответствии с этим протоколом лейпролид назначается в одно и то же время цикла, но обычно в более низкой дозе, часто 5 единиц в день вместо 10 единиц. Затем он полностью прекращается после того, как у женщины начнутся месячные и начинается прием препарата ФСГ.

Способность этого протокола подавлять LH не так полна, как у стандартного длинного протокола. Однако риск преждевременного выброса ЛГ по-прежнему низок, и во время цикла можно проводить анализы крови, чтобы отслеживать любые всплески гормона ЛГ.

Стимуляция антагонистом или протокол микровспышки - это варианты стимуляции ЭКО, кроме длинного протокола .

Обзор стимуляции яичников при ЭКО

.

Конвенция Овьедо и протоколы к ней

Конвенция о защите прав человека и достоинства человека в связи с применением достижений биологии и медицины: Конвенция о правах человека и биомедицине (ETS № 164) была открыта для подписания 4 апреля 1997 года в Овьедо (Испания). ).

Настоящая Конвенция является единственным юридически обязательным международным документом о защите прав человека в биомедицинской сфере.

Он основан на принципах, установленных Европейской конвенцией о правах человека в области биологии и медицины.

Это рамочная конвенция, цель защиты достоинства и идентичности всех людей и гарантия каждому, без дискриминации, уважение их неприкосновенности и других прав и основных свобод в отношении применения биологии и медицины.

Он устанавливает фундаментальные принципы, применимые к повседневной медицинской практике, и рассматривается как таковой в Европейском соглашении о правах пациентов. Он также конкретно занимается биомедицинскими исследованиями, генетикой и трансплантацией органов и тканей.

Положения Конвенции доработаны и дополнены Дополнительными протоколами по конкретным вопросам.

.

Смотрите также

НА ВЕРХ