Криопротокол без овуляции


Схема Крио в ЕЦ без привязки к овуляции + нужен взгляд со стороны.

Девочки, всем привет!

Поделитесь, пжлст, у кого была схема криопротокола в ЕЦ без привязки к ДФ и овуляции?

Где врач ориентируется на эндометрий и уровень гормонов (прогестерона <3,5 нмоль/л (1,5 нг/мл) и эстрадиола).

И не ждя овуляцию, как устраивает эндометрий и низкий прогестерон по анализу крови врач подключает прогестерон и на 5 день прогестерона перенос.

1) Чем эта схема отличается от стандартной, где завязано на О?

Тем, что эндометрий более свежий?

Но Ведь в стандартной схеме тоже мониторим прогик, чтобы он был ниже 3,5 (1,5), что говорит, что он не перешел еще в след фазу..

2) Насколько эта схема рабочая и у кого с ней получилась Б?

А кому она не подошла и почему?

===========

Помогите посмотреть на ситуацию со стороны.

Есть в моих рассуждениях зерно здравого смысла, а то уже честно говоря взрыв мозга.

Ранее было 5 крио.

2 на згт. Згт мне не подходит. Их отметаем.

В ЕЦ было 2 крио в 2016 году. Один из них закончился Б.

Пошла за вторым ребенокм, тк оставались еще 2 эмбриона. Бласты 4ав и 4аа

Крио в ец в июне 2019 - пролет.

Сейчас нахожусь в 6-ом ЕЦ.

Из завершенных крио в ец успешный был на летрозоле в 2016, где летрозол дал супербыстрый рост ДФ и

на 9 дц дф был 19 мм

на 10 дц триггер 5000

на 11 дц начали прогестерон

На 15 дц перенос.

Из пролетных (в 2016 году и в июне 2019, в прошлом цикле) прогик подключали только на 15 дц, тк дф рос значительно медленнее и перенос на 19 дц тоже после триггера и Овуляции на 5 день от начала прогестерона.

Текущий крио решили тоже попробовать на летрозоле. Но супербыстрого роста ДФ не получилось.

В нач цикла вылезло большое ЖТ, его убрали норколутом за 7 дней, начался новый цикл на отмене, подключили летрозол, но ДФ растет фигово. На 9дц всего 15 мм (а в 2016 был уже 19 мм)

На 13 дц 16,5 мм

И прогестерон не супернизкий. На 9дц - 2,73 нмоль.

Сегодня (14 дц)по идее должна колоть триггер, завтра на 15 дц начинать прогестерон на ночь вставлять.

Сейчас утром еще раз пересдала прогестерон, перед триггером, но наверное буду сниматься, тк ощущение, что протокол не пошел. Хотя Ре говорит, что все хорошо.

============

В связи со всем вышеизложенным вопросы:

1. Я спросила у Ре о схеме крио без привязи к О, но она эту идею как-то не поддержала, сказала, что они ориентируются на гормоны и О.

2. Я спросила, что может быть в полетных крио, где прогестерон начинали на 15 дц, а перенос на 19 дц - это поздно для меня,

А удачный крио, где прогестерон подключили на 11 дц и перенос на 15 дц - мне подходит?

Но она ответила, что это совпадение просто. Типа не важно на какой дц перенос на 15 или 19, отталкиваются от гормонов.

А у меня ощущение, что это не совпадение.

И в текущем крио опять получается перенос на 19 дц(((. А эмбрион последний и не хочется им разбрасываться и штамповать пролетные крио(

Как Вы считаете есть в моих мыслях здравый смысл или Ре права и я ошибаюсь и не важно на какой дц перенос?

Очень хочется попробовать крио без привязки к О, но как убедить Ре?

Спасибо, что дочитали!

Буду благодарна за мысли, опыт и идеи.

Что такое протокол криосекции

Криосекционирование Введение

Процедура криосекции также известна как процедура замороженной секции. Это лабораторная процедура, используемая для проведения микроскопического анализа образца. Эта процедура чаще всего используется в онкологической хирургии. Для интраоперационной консультации необходим патолог. Патолог оценивает и исследует образец. Затем патолог сообщает, является ли образец доброкачественным или злокачественным. Они также несут ответственность за информирование о том, свободен ли край резекции от рака.Практикуемая сегодня процедура криосрезов основана на технике, описанной доктором Луи Б. Уилсоном в 1905 году. Криосрезы - хороший способ визуализировать мельчайшие детали клетки. Хотя срезы менее стабильны, чем срезы, залитые смолой и парафином, криосрезы обычно лучше подходят для сохранения и обнаружения антигенов с помощью микроскопии. Подготовка криосекции обычно выполняется за день. Быстрое замораживание помогает уменьшить образование кристаллов льда и минимизировать морфологические повреждения.Криосрезы можно использовать в различных процедурах, таких как гибридизация in situ, иммуногистохимия и ферментативная деградация.

Реагенты

Некоторые из реагентов, используемых в протоколе криосрезов:

· Фиксатор (например, формальдегид)

· Состав для оптимальной температуры резки (OCT) (например, Tissue-Tek; Sakura Finetek USA)

· Окрашивание раствор (например, толуидиновый синий, гематоксилин, эозин или др.)

· Образец свежей ткани

Оборудование для криосекции

Важное оборудование, которое потребуется при выполнении протокола криосекции:

· Кисть (верблюжья шерсть)

· Контейнер для хранения образца ткани

· Криостат с металлическими решетками (Криостат можно сравнить с микротомом в морозильной камере.Это машина, способная нарезать тонкие срезы. Хотя в дорогих больничных патологических лабораториях можно арендовать криостаты)

· Предметные стекла (предметные стекла могут быть силанизированы или покрыты поли-L-лизином)

· Пластмассовая или металлическая тканевая форма

· Смоченные ткани

Процедура криосекции

Процедура криосекции может быть выполнена быстро, поскольку она относительно проста.

A) Подготовка криостата

i) Используйте подходящие чистящие средства и очистите криостат.

ii) Вставьте новое стерильное лезвие в криостат.

iii) Если речь идет о замороженных залитых блоках или свежезамороженных образцах, используйте замороженный материал для заливки, чтобы прикрепить образец к оправе в правильном положении для резки. Убедитесь, что режущая поверхность параллельна лезвию.

iv) Дать образцу уравновеситься до температуры криостата. Это занимает примерно 20 минут.

B) Подготовка криосрезов

i) Заморозить образец ткани до 2 раз.0 см в диаметре в ОКТ с использованием подходящей тканевой формы. Прикрепите ОКТ с тканью к металлическим сеткам криостата. При комнатной температуре OCT вязкий, но замерзает при -20⁰C. В зависимости от типа ткани оптимальная температура замораживания может отличаться. Например, ткани мозга оптимально замораживают при -3 ° C в среде M-1.

ii) Вырежьте срезы размером примерно от 5 до 15 мкм в криостате при температуре -20 ° C. Температуру камеры резки можно регулировать в зависимости от исследуемой ткани.Эти участки при необходимости можно перемещать с помощью зубочисток и щеток. Щеточка из верблюжьей шерсти может быть полезна для направления сливающейся части по лезвию.

iii) Удалите складки и складки на разрезанных участках.

iv) В течение 1 минуты после разрезания среза ткани перенесите его на предметное стекло комнатной температуры, прикоснувшись предметным стеклом к ​​ткани. Это позволяет отрезанной части прилипать к слайду. Пальцем в перчатке потрите нижнюю часть предметного стекла, чтобы улучшить передачу тепла, так как это способствует сцеплению.Все это должно быть выполнено в течение 1 минуты после резки секции. Это позволяет избежать сублимационной сушки образца. Использование слайдов, покрытых силанизированным или поли-L-лизином, улучшает сцепление среза.

v) Дополнительным шагом является использование ультрафиолетовой обработки предметного стекла для увеличения прилипания и стерилизации. Это можно сделать, инкубируя предметное стекло в течение 15-20 минут под ультрафиолетовым светом. Лучше всего использовать ультрафиолетовый стерилизационный кожух.Свет слегка разрушает мембрану, способствуя прилипанию и стерилизации. Важно не инкубировать дольше 30 минут, так как это может повредить мембрану.

vi) Для оценки сохранности и ориентации ткани первое слайд из каждого набора можно окрасить толуидиновым синим, эозином, гематоксилином или различными водными красителями.

vii) Немедленно погрузите предметное стекло в фиксатор. Некоторые исследователи сушат секцию на предметном стекле на воздухе при температуре воздуха, чтобы обеспечить максимальное прилегание перед фиксацией.Однако этот метод имеет недостаток, заключающийся в том, что поверхностное натяжение вызывает искажение ячеек, что приводит к потере деталей с высоким разрешением. Это также может привести к изменению результатов иммуноокрашивания.

viii) Любые неиспользованные ткани должны быть покрыты слоем ОКТ, чтобы избежать сушки вымораживанием и хранения оставшихся образцов при -70⁰C. При длительном хранении добавление в контейнер влажной ткани помогает предотвратить высыхание, особенно в морозильной камере.

Поиск и устранение неисправностей криосекции

Если ткань трудно разрезать, важно учитывать следующее:

· Если замороженная ткань в ОКТ не разрезана на тонкий и гладкий лист, нож может затупиться.

· Ткань может быть трудно разрезать, если ткани имеют различную текстуру, воду или жир.

Ссылки

1) Fischer AH, Jacobson KA, Rose J, Zeller R. Криосекция тканей. CSH Protoc. 2008: pdb.prot4991.

2) Протокол криосекционирования. Молекулярные машины и отрасли. Дата обращения 8.01.2019. http://www.molecular-machines.com/libraries.files/Cryosectioning.pdf

.

Протоколы ЭКО для стимуляции лекарствами и лекарствами

  • Чтобы добиться максимального успеха при экстракорпоральном оплодотворении, мы хотим получить от женщины большое количество высококачественных яиц . Обычно мы стараемся получить около 10-18 яиц во время процедуры извлечения яиц.
  • Показатели успешности ЭКО коррелируют с количеством извлеченных яйцеклеток.
  • Существует несколько протоколов приема лекарств для стимуляции яичников, которые используются для «накачки» яичников для образования достаточного количества фолликулов и яиц .Без стимулирующих препаратов яичники производят и выделяют только 1 зрелую яйцеклетку за менструальный цикл (месяц).
  • Обычно используемые схемы стимуляции включают инъекции фолликулостимулирующего гормона - ФСГ.

Существует 3 наиболее часто используемых протокола стимуляции яичников для экстракорпорального оплодотворения:

  1. Протокол лютеинового люпрона, также называемый «длинный люпрон», или агонист «понижающей регуляции»
  2. Протоколы антагонистов, которые включают использование препаратов антагонистов ГнРГ
  3. Протоколы обострения и микровспышек, также называемые короткими протоколами люпрона или короткими протоколами, используются для пациентов, у которых ожидается низкий ответ на стимуляцию яичников


Трехмерное ультразвуковое изображение нескольких фолликулов в яичнике, стимулированном для ЭКО
Наши трехмерные ультразвуковые аппараты рассчитывают точный размер фолликулов


Протоколы стимуляции ЭКО в США обычно включают использование 3 типов лекарств:

  1. Лекарство для подавления выброса ЛГ и овуляции до тех пор, пока не будут готовы развивающиеся яйца.
    Для этого используются 2 класса препаратов:
  • Агонист GnRH (агонист гонадотропин-рилизинг-гормона), такой как Lupron
  • Антагонист ГнРГ, такой как ганиреликс или цетротид
  • Продукт ФСГ (фолликулостимулирующий гормон) для стимуляции развития нескольких яиц
    • Gonal-F, Follistim, Bravelle, Menopur
  • ХГЧ (хорионический гонадотропин человека), вызывающий окончательное созревание яиц
  • Яичники стимулируют инъекционными препаратами ФСГ в течение примерно 7-12 дней, пока не разовьются множественные фолликулы зрелого размера.


    Какова цель хорошей стимуляции яичников при экстракорпоральном оплодотворении?

    При стимуляции яичников для экстракорпорального оплодотворения цель состоит в том, чтобы получить приблизительно от 8 до 15 качественных яйцеклеток во время процедуры извлечения яйцеклеток.

    Мы не хотим, чтобы чрезмерная стимуляция яичников могла вызвать значительный дискомфорт для женщины, а в редких случаях может привести к синдрому гиперстимуляции яичников, СГЯ.

    Мы также не хотим, чтобы стимуляция яичников была недостаточной, и даем нам только несколько яйцеклеток, если мы могли бы получить больше, используя более высокие дозы лекарств и т. Д.

    Экстракорпоральное оплодотворение может быть успешным при очень небольшом количестве извлеченных яиц, но вероятность успеха значительно выше, когда извлекается больше яиц.

    Подробнее о количестве яйцеклеток и успешности экстракорпорального оплодотворения


    При стимуляции яичников врач-специалист по бесплодию должен:

    • Выберите правильный протокол приема лекарств и режим дозирования
    • Наблюдать за прогрессом стимуляции пациента, чтобы можно было правильно отрегулировать дозы лекарств
    • Триггер с ХГЧ в идеальное время.Раннее или слишком позднее срабатывание снижает успех и иногда может повысить риск гиперстимуляции яичников (если срабатывает поздно).

    Ультразвуковое исследование нескольких фолликулов (черные области) в стимулированном яичнике
    Желтыми курсорами очерчивают фолликул диаметром 15 мм
    Фолликулы наиболее зрелого размера (около 15-20 мм в диаметре) даст зрелые яйца при извлечении


    Использование новейшей ультразвуковой технологии 3D для получения точных измерений

    Контроль качества на протяжении всего процесса очень важен при экстракорпоральном оплодотворении.Один из способов улучшения контроля качества в нашей программе - использование узкоспециализированного ультразвукового оборудования.

    Мы используем ультразвуковой аппарат GE Voluson E8 со встроенным компьютером, который может определять и точно измерять развивающиеся фолликулы.

    Мы обнаружили, что этот метод более точен и надежен по сравнению с традиционным методом, который обычно представляет собой ручные измерения в двух измерениях.

    Компьютер в аппарате отслеживает границы фолликула (в трех измерениях).Затем он рассчитывает объем для каждого из них. По объему он вычисляет средний диаметр каждого фолликула (как если бы он был сферой).

    Эта технология дает нам более точные и надежные измерения, чем мы делали раньше.


    Ультразвуковое изображение показывает три плоскости в объеме данных для одного яичника
    У этого пациента почти конец стимуляции - в яичнике видны многочисленные фолликулы
    Верхний левый = сагиттальная плоскость, верхний правый = поперечная плоскость, нижний левый = коронарный плоскость
    Справа внизу - трехмерное изображение фолликулов (созданное компьютером)
    См. ниже те же изображения крупным планом


    Крупный план поперечной плоскости (из того же изображения выше)
    Компьютерные трассировки фолликулов разного цвета


    Крупный план трехмерного изображения нескольких фолликулов в стимулированном яичнике
    Компьютер в аппарате сделал "визуализированное" изображение из захваченного объема данных
    Очевидно, что фолликулы не имеют сферической формы


    Как осуществляется мониторинг стимуляции экстракорпорального оплодотворения?

    • Мы пытаемся стимулировать женщину получить как минимум 4 фолликула диаметром 14-20 мм.
    • В идеале должно быть не менее 8 фолликулов размером 13-20 мм.
    • Цель - получить хорошее количество (около 8-15) качественных яиц
    • Контролируются уровни гормонов в крови и размеры развивающихся фолликулов.
    • Ультразвук используется для измерения фолликулов (обсуждалось выше на этой странице)
    • Уровень гормона эстрогена в крови важен. Уровни эстрогена (фактически эстрадиола) обычно ниже 60 пг / мл на исходном уровне цикла и значительно повышаются по мере развития нескольких фолликулов.
    • Пиковые уровни эстрадиола при ЭКО во время ХГЧ обычно составляют от 1000 до 4000 пг / мл.
    • Процесс стимуляции обычно занимает около 8-10 дней.

    График, показывающий уровни гормона эстрогена во время стимуляции ЭКО
    Эстрадиол начинает снижаться и повышается до 1000-4000 пг / мл к моменту инъекции ХГЧ

    • Инъекция ХГЧ проводится, когда уровень эстрогена и измерения фолликулов лучше всего подходят для успешного результата.Введение ХГЧ необходимо, чтобы вызвать окончательное созревание яйца.
    • Забор яйцеклеток запланирован на 34-35 часов после инъекции ХГЧ - незадолго до того, как организм женщины может начать выделять яйца (овуляция).
    См. Образец календаря ЭКО Lupron с указанием времени посещения офиса и процедур

    Сколько фолликулов нужно, чтобы забеременеть с помощью ЭКО?

    Обычно получить достаточно фолликулов для развития несложно.Однако иногда яичники плохо реагируют - и наблюдается небольшое количество растущих фолликулов. Способность яичников хорошо стимулировать и давать нам большое количество яйцеклеток можно довольно хорошо предсказать с помощью ультразвукового исследования - подсчета антральных фолликулов.

    Минимальное количество фолликулов, необходимое для проведения процедуры экстракорпорального оплодотворения, зависит от нескольких факторов, включая их размер, возраст женщины, результаты предыдущих стимуляций и готовность пары (и врача) продолжить извлечение яйцеклеток, когда они будут будет получено небольшое количество яиц.

    По нашему опыту, успешность ЭКО очень низкая при менее чем 3 зрелых фолликулах.

    Некоторые врачи скажут, что у вас должно быть не менее 5 яйцеклеток размером 14 мм или больше, в то время как другие могут выполнять извлечение яйцеклеток только с одним фолликулом. Большинство программ ЭКО в США требуют как минимум 3-4 зрелых (или близких к зрелости) фолликулов.

    Женщины, которые с большей вероятностью будут плохо реагировать на стимуляцию яичников, - это женщины с низким числом антральных отделов, женщины старше 37 лет, женщины с повышенным уровнем ФСГ и женщины с другими признаками сниженного резерва яичников.


    Подробная информация о длинном протоколе Lupron, также называемом понижающей регуляцией, или средне-лютеиновым Lupron

    Подробная информация о протоколах ЭКО антагонистов - с использованием Ганиреликса или Цетротида

    Подробная информация о протоколах вспышек Lupron - также называемых микровспышками

    Подробная информация о подкожных и внутримышечных инъекциях

    .

    ДНК - Протоколы изоляции

    Этот протокол дает высокоочищенный препарат ДНК из биопсии хвоста мыши.

    1. Удалите 0,5 мм хвоста из полипропиленовой микроцентрифужной пробирки (не измельчая). (Пробирки должны иметь плотно прилегающие колпачки, чтобы не было утечек в шагах 3 и 7 ниже.)

    2. Добавьте 0,5 мл буфера для расщепления ДНК с протеиназой К до конечной концентрации 0,5 мг / мл. (0,5 мг / мл - это высокая концентрация и, вероятно, ее можно уменьшить.)

    Буфер для расщепления ДНК:

    • 50 мМ Трис-HCl pH 8.0
    • 100 мМ ЭДТА, pH 8,0
    • 100 мМ NaCl
    • 1% SDS

    3. Инкубируйте в течение ночи при 50-55 ° C при легком встряхивании. (На этом этапе механическое перемешивание в значительной степени способствует полному разрушению хвоста.)

    4. Пробирки быстрого вращения для удаления раствора внутри крышки.

    5. Заполните внутреннюю часть крышки пробирки для микроцентрифугирования вакуумной смазкой. (Для дозирования мы используем смазку для высокого вакуума Dow Corning и шприц объемом 10 куб. См.)

    6. Добавьте 0,7 мл нейтрализованного фенола / хлороформа / изоамилового спирта (25: 24: 1).

    7. Достаточно энергично перемешайте. (НЕ вортексировать; мы используем клинический ротатор в течение 1 часа.)

    8. Прокрутите в микроцентрифуге на максимальной скорости 5 минут и перенесите 0,5 мл верхней фазы в новую микроцентрифужную пробирку. (Используйте P1000 для переноса и осторожно протяните водную фазу через наконечник несколько раз после переноса, если ДНК все еще находится в большой студенистой массе.)

    9. Добавьте 1 мл 100% этанола при комнатной температуре и переверните (используя клинический ротатор, если хотите) до образования осадка ДНК. (примерно 1 минута).

    10. Прокрутите в микроцентрифуге 5 минут и осторожно удалите супернатант.

    11. Добавьте 0,5–1 мл 70% этанола (-20 ° C) и несколько раз переверните.

    12. Прокрутите в микроцентрифуге 5 минут и осторожно удалите супернатант.

    13. Пробирки быстрого вращения и удалить последнюю каплю раствора этанола с помощью капиллярной пробирки на 25 мкл.

    14. Высушите на воздухе при комнатной температуре или в эксикаторе (по желанию, на ночь).

    15. Добавьте 100-200 мкл ТЕ буфера и инкубируйте при 65 ° C в течение 15 минут для ресуспендирования ДНК.Проведите ДНК через наконечник P1000 после инкубации при 65 ° C, чтобы помочь суспендировать, если хотите.

    16. Используйте 10-20 мкл для расщепления рестриктазами.

    17. Общий выход составляет примерно 20-50 мкг ДНК, 0,1-0,25 мкг / мкл.

    .

    Протокол ЭКО Lupron с использованием препаратов для стимуляции яичников

    График, показывающий уровни гормона эстрогена во время стимуляции ЭКО
    Эстрадиол начинает низкий и повышается до 1000-4000 пг / мл к моменту инъекции ХГЧ

    Остановка протокола Lupron

    Некоторые женщины будут «чрезмерно подавлены» стандартным длинным протоколом или будут плохо реагировать по какой-либо другой причине. Протокол «стоп люпрон» - это одна из возможностей для лучшего ответа на стимуляцию.

    В соответствии с этим протоколом лейпролид назначается в одно и то же время цикла, но обычно в более низкой дозе, часто 5 единиц в день вместо 10 единиц. Затем он полностью прекращается после того, как у женщины начнутся месячные и начинается прием препарата ФСГ.

    Способность этого протокола подавлять LH не так полна, как у стандартного длинного протокола. Однако риск преждевременного выброса ЛГ по-прежнему низок, и во время цикла можно проводить анализы крови, чтобы отслеживать любые всплески гормона ЛГ.

    Стимуляция антагонистом или протокол микровспышки являются вариантами стимуляции ЭКО, кроме длинного протокола .

    Обзор стимуляции яичников при ЭКО

    .

    Смотрите также

    НА ВЕРХ